来源：iNature
CRISPR-Cas9技术被广泛用于基因组编辑，目前正在临床试验中作为治疗剂进行测试。 此技术的许多应用都依赖化脓链球菌的Cas9（SpCas9），据报道，许多工程或进化的SpCas9变体会影响Cas9的特异性。但是，对于能特定插入+1的Cas9变体，还没有发现。近期，博德研究所张锋团队在Molecular Cell 在线发表题为“Highly Parallel Profiling of Cas9 Variant Specificity”的研究论文，该研究该研究描述了基于标签的标签整合位点测序（TTISS）方法，这是一种有效的，可扩展的分析双链断裂（DSB）的方法。该研究将其并行应用于跨59个靶标的8个Cas9变体。此外，该研究生成了成千上万个其他Cas9变体，并筛选了具有增强的特异性和活性的变体，从而确定了LZ3 Cas9，这是一种具有唯一+1插入模式的高特异性变体。总之，这项全面的比较揭示了Cas9活性和特异性之间的一般权衡，并提供了有关+1插入产生频率的信息，这对纠正移码突变具有影响。
众所周知，Cas9活性和编辑结果随蛋白质和指导RNA的不同而变化，因此凭经验确定最佳的酶与指导组合可能会有所帮助，特别是对于临床应用而言。尽管已开发出多种评估脱靶裂解的技术，但这些技术的通量相对较低，仅限于每个条形码样品的一个指南。因此，该研究开发了基于标签的标签整合位点测序（TTISS），这是一种有效，快速，可扩展的方法来评估编辑结果。
该研究描述了基于标签的标签整合位点测序（TTISS）方法，这是一种有效的，可扩展的分析双链断裂（DSB）的方法。该研究将其并行应用于跨59个靶标的8个Cas9变体。此外，该研究生成了成千上万个其他Cas9变体，并筛选了具有增强的特异性和活性的变体，从而确定了LZ3 Cas9，这是一种具有唯一+1插入模式的高特异性变体。这项全面的比较揭示了Cas9活性和特异性之间的一般权衡，并提供了有关+1插入产生频率的信息，这对纠正移码突变具有影响。
总之，与WT SpCas9相比，新近进化的LZ3 Cas9变体表现出高活性，增加的特异性和不同的+1插入模式。LZ3 Cas9的进一步合理工程可能为非模板化校正人群中致病性移码突变提供途径。
来源：Plant_ihuman iNature
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