Cell Chem Biol | 化学生物学助力开发新型抗胶质母细胞瘤抑制剂

中国生物物理学会  |   2019-01-18 01:23


山东大学药学院李敏勇教授、中国人民解放军陆军军医大学李红丽教授与美国德州大学健康中心Leng Han及Texas A&M大学教授Yubin Zhou课题组合作在Cell子刊《Cell Chemical Biology》上发表题为” Discovery of small molecule inhibitors of the HSP90-calcineurin-NFAT pathway against glioblastoma”的论文,报道了一种结构新颖的HSP90-Calcineurin-NFAT信号通路抑制剂,用于多形性神经胶质母细胞瘤的治疗。


多形性性神经胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)属于IV级神经胶质瘤,约占神经胶质瘤的50%,恶性程度最高,极易浸润周围的正常脑组织而引发一系列进行性的脑部疾病,如颅内压升高、脑水肿、进行性头痛、恶心、呕吐、视力障碍、晕厥、局部或全身的癫痫发作、神经功能或认知障碍等,即使确诊后给予及时      的手术切除及放化疗治疗,病人的平均生存期仅为15-17个月。目前临床应用的抗GBM肿瘤一线药物为烷基化试剂替莫唑胺(TMZ),但长期应用容易产生耐药性且对复发性GBM疗效差,因此临床迫切需要作用于其他靶点的药物,与TMZ进行联合用药或者作为TMZ的替代药,进而改善患者生存期。


活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)是一类重要的转录因子,首先在人T细胞中被发现,是T细胞活化、分化及相关细胞因子分泌的重要调节因子。近年来,越来越多的研究显示,NFAT在多种肿瘤细胞中过表达或超活化,包括神经胶质母细胞瘤细胞,NFAT信号通路功能失调使某些关键癌症相关基因表达上调,广泛促进癌细胞的增殖、代谢、转移、血管生成及肿瘤微环境形成等,促进肿瘤恶性表型的产生。因此,课题组基于GFP-NFAT核转位的高内涵筛选方法,从Specs数据库筛选出一系列活性化合物,其中对NFAT核转位抑制活性最好的化合物为1,2-二酮萘类化合物YZ01,进一步对其结构进行优化,得到活性最好的化合物YZ129,其NFAT核转位的抑制活性IC50值达到了纳摩级。随后,在多形性神经胶质母细胞瘤细胞及动物模型评价其抗肿瘤活性,结果显示YZ129能显著抑制U87细胞的增殖、迁移、运动能力,能引起细胞周期停滞在G2/M期,促进U87细胞的凋亡。YZ129能显著抑制皮下移植及原位神经胶质母细胞瘤的生长,组织HE及免疫染色发现经YZ129治疗后肿瘤细胞生长受到抑制且发生明显的凋亡。



NFAT的激活需要上游一系列信号转导分子的激活,包括钙离子通道的开放、钙调磷酸酶的激活、NFAT核内转运等。因此,进一步对YZ129具体作用的分子机制进行了研究,发现YZ129是通过直接抑制HSP90活性,引起钙调磷酸酶(calcineurin)的活性抑制,进而影响NFAT向核内转运。在以往的研究中,人们通常关注HSP90下游的HIF、AKT/mTOR、Ras-Raf-ERK 等信号通路在肿瘤发生与发展中的作用,而对calcineurin-NFAT通路关注较少,本研究对HSP90-calcineurin-NFAT通路在肿瘤发生与发展中的作用进行了系统性研究,NFAT的下游调节基因多与肿瘤的转移及侵袭有关,因此对于高侵袭性的多形性神经胶质母细胞瘤来说,HSP90-Calcineurin-NFAT信号通路抑制剂可以为其提供新的治疗策略。鉴于NFAT对T细胞活化、分化及相关细胞因子分泌具有重要的调节,因此HSP90在免疫调节方面的作用不可忽视。


在传统的药物研究中,可能只关注某一个靶点或一条通路,而事实上细胞信号通路是一个复杂的网络结构,经过药物处理后,细胞的很多通路可能都发生变化。因此,在本研究中,采用RNA-Seq及反向蛋白质列阵(RPPA)等 研究方法,研究了药物对细胞通路整体的影响,发现药物对细胞低氧、糖酵解及RTK/PI3K/AKT/mTOR 相关信号产生较强的抑制作用,药物处理后细胞表型的变化都能找到相应的分子基础。另外,RPPA蛋白组学研究发现细胞骨架蛋白Vimentin、糖酵解相关蛋白LDHA以及NDRG1等蛋白表达发生了显著下降,同时大部分表达下降的蛋白为HSP90的客户蛋白,从功能方面进一步验证了YZ129作用的靶点为HSP90。RNA-Seq及RPPA的结果同时发现有些癌基因表达上调,如FOSB, INHBA, EDN1, IRS2, KDM6B, TGM2等,这可能是引起耐药性的原因。药物处理前后,蛋白mRNA及蛋白水平的表达变化提供了较为全面的药效学信息,药物的进一步研发提供指导,本论文的研究为其他药物的研究提供一定的借鉴意义。


李敏勇教授课题组的博士研究生刘真真(周育斌教授课题组联合培养博士研究生)、中国人民解放军陆军军医大学李红丽教授、周育斌教授课题组博士研究生何涟、韩冷教授课题组向禹博士研究生是该文章的共同第一作者。该工作得到了国家自然科学基金、山东省泰山学者计划项目、中国博后面上基金的支持。


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来源:BSC-1979 中国生物物理学会

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