来源：植物科学最前沿
CRISPR-Cas12b系统在拟南芥中的靶位点编辑该研究首先针对拟南芥的密码子优化Cas12b序列，双端添加NLS序列，从而保证Cas12b蛋白在植物拟南芥细胞核中的表达。随后，选取PDS3、FLS2、GL2 和TT4基因位点进行靶位点突变，以靶向相近位点的Cas9蛋白作为对照。T7E1检测的结果显示，Cas12b蛋白在大部分位点造成了插入/缺失的突变。深度测序结果显示，Cas12b蛋白的编辑效率从0%-4.3%不等，且具有位点效应，编辑形式主要是在切割位点产生5-13 bp的片段缺失。进一步设计采用双靶点的编辑方式，实现了同时对双位点的靶向突变。并且，通过控制双靶点的距离，可以实现1,000 bp左右的大片段缺失突变。于此同时，脱靶效应验证表明该蛋白不能容忍大于3 bp的guide错配。最后，通过稳定转化拟南芥植株，得到了靶基因功能缺失的编辑突变体，证明了CRISPR-Cas12b系统以及新型的BvCas12b蛋白在拟南芥中的基因组编辑能力。孔德晶课题组主要在植物中开展基因组编辑的研究，该论文验证的新型Cas12b蛋白进一步拓展了CRISPR-Cas12b系统在植物中的应用。河北科技大学硕士生吴凡、乔新宇和赵亚飞为该论文的共同第一作者，孔德晶为通讯作者，首都师范大学刘良玉和中国农科院（深圳）农业基因组所汪泉为共同通讯作者。该研究得到了河北省自然科学基金、河北省一流学科建设基金、河北省教育厅科学技术研究基金及国家自然科学基金的资助。参考文献1. Teng F, Cui T, Feng G, Guo L, Xu K, Gao Q, Li T, Li J, Zhou Q, Li W (2018) Repurposing CRISPR-Cas12b for mammalian genome engineering. Cell Discovery 4: 632. Strecker J, Jones S, Koopal B, Schmid-Burgk J, Zetsche B, Gao L, Makarova KS, Koonin EV, Zhang F (2019) Engineering of CRISPR-Cas12b for human genome editing. Nature Communications 10: 2123. Ming M, Ren Q, Pan C, He Y, Zhang Y, Liu S, Zhong Z, Wang J, Malzahn AA, Wu J, Zheng X, Zhang Y, Qi Y (2020) CRISPR–Cas12b enables efficient plant genome engineering. Nature Plants 6: 202-208
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